文献类型： 中文期刊

作者： 周嫦嫦 ¹ ; 张海玲 ² ; 李佶恺 ² ; 尚晨 ² ; 朱瑞芬 ² ; 刘慧莹 ² ; 付春祥 ³ ; 申忠宝 ² ;

作者机构： 1.哈尔滨师范大学生命科学与技术学院

2.黑龙江省农业科学院草业研究所

3.中国科学院青岛生物能源与过程研究所

关键词： CRISPR/Cas9系统;蒺藜苜蓿;基因组编辑;载体构建;靶位点

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN：

年卷期： 2021 年 003 期

页码： 109-113,162-163

收录情况： 北大核心

摘要： 为了构建基于CRISPR/Cas9系统的蒺藜苜蓿高效基因组编辑载体,便于开展蒺藜苜蓿的基因组编辑研究,试验以蒺藜苜蓿基因组中的PDS基因为靶标,应用CRISPR-P软件设计2条特异sgRNA靶位点序列,以pYLCRISPR/Cas9-P35S为骨架载体,以适合双子叶植物的AtU3b作为sgRNA转录启动子,并引入可以显著提高基因编辑效率的tRNA保守序列,采用Golden Gate克隆法构建双靶点CRISPR/Cas9植物表达载体。结果表明:针对蒺藜苜蓿PDS基因设计的双靶点pYLCRISPR/Cas9植物表达载体的各个表达盒组装顺序完全正确,DNA碱基序列准确无误。说明pYLCRISPR/Cas9-AtU3b-tRNA-sgRNA基因编辑载体构建成功,可以为进一步开展农杆菌介导的蒺藜苜蓿基因组编辑研究提供载体,为双子叶植物开展基因编辑研究提供新的载体构建策略。