文献类型： 中文期刊

作者： 尉翔栋 ¹ ; 吕晨晨 ¹ ; 朱肖亭 ¹ ; 冯亚杰 ¹ ; 辛晓玲 ¹ ; 施巧婷 ¹ ; 梁瑞清 ¹ ; 徐照学 ¹ ; 王二耀 ¹ ; 滑留帅 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院畜牧兽医研究所/河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室;河南农业大学牧医工程学院;郑州外国语学校

关键词： 牛;MSTN基因;基因编辑;CRISPR-Cas9;胚胎

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2019 年 02 期

页码： 131-136

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了给双肌肉牛品种的培育提供新的遗传素材,拟利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎。从采集到的86对牛卵巢中收集卵母细胞进行成熟培养以及体外受精,并使用在线软件设计能够在体外高效编辑牛MSTN基因的gRNA序列,将验证后所得的体外切割活性最高的gRNA与Cas9 mRNA的混合物显微注射牛的受精卵,培养至囊胚后,利用T7EI核酸内切酶法检测囊胚中MSTN基因的编辑情况,然后将基因编辑阳性的囊胚样品进行测序验证。结果表明,牛胚胎体外培养平均囊胚率为21.28%;在设计的多条gRNA序列中,gRNA5的体外切割活性最高,为96.00%;将Cas9 mRNA和gRNA5的混合物显微注射受精卵并培养至囊胚后,T7EI核酸内切酶检测表明囊胚MSTN基因切割阳性率为15.40%;对MSTN基因编辑囊胚阳性样品测序表明,在gRNA5靶位点存在部分片段缺失。综上,说明利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功获得了牛MSTN基因编辑胚胎。