文献类型： 中文期刊

作者： 陈柳 ¹ ; 余斌 ¹ ; 倪征 ¹ ; 华炯钢 ¹ ; 叶伟成 ¹ ; 云涛 ¹ ; 张存 ¹ ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 鸭瘟病毒;鸭坦布苏病毒;E蛋白;细菌人工染色体;重组病毒

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2015 年 27 卷 11 期

页码： 1889-1895

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为开展鸭瘟病毒-鸭坦布苏病毒二联苗的研究,将密码子优化的鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因插入转移载体p EP-BGH-end构建了p EP-BGH-E重组表达质粒。在鸭瘟病毒疫苗株细菌人工染色体(p DEVvac)的基础上,首先通过Red E/T两步重组法构建了EF1启动子替换GFP基因CMV启动子的p DEV-EF1突变体克隆,并将p EP-BGH-E质粒上的重组表达框p CMV-E-BGH-p A再次通过两步重组克隆至p DEV-EF1突变体的US7和US8基因之间,构建了携带有外源基因DTMUV E的突变体克隆p DEV-E。用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)获得了重组病毒r DEV-E。病毒蚀斑大小测定结果显示,r DEV-E在CEFs上的蚀斑面积较亲本株相比稍有减少。Western blotting分析表明,外源蛋白E在病毒感染的CEFs细胞中成功表达。