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正交设计优化菜薹ISSR反应体系研究

文献类型： 中文期刊

作者： 冒维维 1 ; 马金骏 1 ; 薄天岳 2 ; 高红胜 1 ; 陈学好 1 ;

作者机构： 1.扬州大学园艺与植物保护学院

2.上海市农业科学院设施园艺重点实验室

关键词： 菜薹(Brassica campestris L.ssp.Chinensis var.utilisTsen et Lee);ISSR;正交设计;梯度PCR

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2006 年 S2 期

页码： 137-141

收录情况： CSCD

摘要： 菜薹原产中国,是华南地区重要的特产蔬菜之一。目前,分子标记技术已广泛应用于多种作物研究,但在菜薹上的应用研究刚刚起步。ISSR主要是由单一引物且以重复序列为主要引物序列的PCR标记,其反应条件受模板DNA、Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTP和引物等因素的影响。正交试验设计能明确各因素间的互作效应,建立最优化的反应体系。本研究利用正交试验设计,从Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、Mg2+4种因素3个水平对菜薹ISSR反应体系进行了优化,确立了适合菜薹的ISSR反应体系并在7个菜薹品种中进行了验证。在20μl反应体系中,含Taq DNA聚合酶1U、dNTP250μmol/L、引物0.25μmol/L、1×PCRbuffer、Mg2+2.5mmol/L、模板DNA30ng。通过梯度PCR测验,确定了适宜的退火温度。这一体系的建立为今后利用ISSR技术进行菜薹种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。

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