文献类型： 中文期刊

作者： 张鑫 ¹ ; 刘爱芬 ¹ ; 张玮 ¹ ; 严红 ¹ ; 乔广行 ¹ ; 燕继晔 ¹ ; 李兴红 ¹ ;

作者机构： 1.北京市农林科学院植物保护环境保护研究所

关键词： 葡萄溃疡病菌;原生质体制备;REMI

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2013 年 40 卷 07 期

页码： 1272-1278

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】摸索葡萄溃疡病菌(Lasiodiplodia theobromae)限制性内切酶介导整合(Restriction enzyme mediated integration,REMI)的转化方法,并构建CSS-01s(L.theobro-mae)的REMI转化子库。【方法】利用REMI转化方法,将线性化的含有潮霉素抗性基因(Hygromycin phosphotransferase gene,Hyg)的pUCATPH质粒转化CSS-01s菌株的原生质体;测定其对潮霉素B的敏感浓度,摸索不同酶解液和酶解时间对原生质体制备的影响,统计不同限制性内切酶酶量对转化效率的影响,以摸索出的最优条件构建CSS-01s菌株的REMI转化子库,采用Southern blot的方法验证转化子。【结果】首次建立了一套L.theobromae的REMI转化方法,经转化得到包含6 000余个转化子的L.theobromae CSS-01s转化子库,随机挑选的5个转化子经Southern blot分析,质粒均插入到了HindⅢ相应的酶切位点处。【结论】浓度为2%崩溃酶+2%蜗牛酶酶混合液、酶解4 h为原生质体获得的最优条件,每管转化体系中加入30 U HindⅢ时转化效率最高,该方法可以用来获得大量不同表型的REMI转化子。