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牛PDGFRA基因克隆及过表达载体构建的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 高一 1 ; 吕阳 1 ; 刘理想 1 ; 张国梁 1 ;

作者机构： 1.吉林省农业科学院畜牧分院

关键词： 牛;血小板衍生生长因子受体α基因;支持细胞;克隆;过表达载体

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2019 年 03 期

页码： 11-14+174

收录情况： 北大核心

摘要： 为了研究血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)基因对牛睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)的增殖作用,试验采用RT-PCR方法扩增PDGFRA基因CDs区,TA克隆并测序,然后用T4 DNA连接酶构建pBI-CMV3-PDGFRA过表达载体,并进行酶切和测序鉴定,最后应用转染试剂FuGene HD将过表达载体转染到SCs中进行荧光观察。结果表明:PCR扩增得到的PDGFRA基因CDs全长为3 276 bp,经NCBI BLAST生物信息学软件对比TA克隆测序序列同源性为100%,构建的pBI-CMV3-PDGFRA过表达载体经鉴定得到的片段和序列结果正确,转染SCs 24 h后在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白。说明试验成功构建出过表达载体pBI-CMV3-PDGFRA,并在SCs中正常表达。

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