文献类型： 中文期刊

作者： 魏蔷 ¹ ; 李青梅 ¹ ; 金前跃 ¹ ; 宋亚鹏 ² ; 白怡霖 ³ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室

2.河南农业大学牧医工程学院

3.郑州大学农学院

关键词： 减蛋综合征病毒;纤维蛋白;中和性单克隆抗体;抗体中和效价;双抗体夹心ELISA

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2024 年 002 期

页码： 128-135

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了制备针对鸡减蛋综合征病毒（EDSV）的中和性单克隆抗体，首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白，经血凝试验（HA）鉴定纤维蛋白的血凝活性，HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠，免疫4次后，小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验（iELISA）效价最高达到1∶409 600，间接免疫荧光试验（IFA）效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞，结合iELISA和IFA检测，经过多轮亚克隆，最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示，单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示，单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白，表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明，单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性，中和效价分别为1∶2~7和1∶2~4。亚型鉴定表明，这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型，重链均为IgG1亚型。将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原，与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%。综上，成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株，二者分泌抗EDSV特异性抗体，且这2种抗体具有中和EDSV感染活性，可应用于EDSV的临床检测。