文献类型： 中文期刊

作者： 高旭东 ¹ ; 王永志 ² ; 时圣凤 ¹ ; 李忠鹏 ³ ; 李小宇 ² ; 徐文静 ² ; 张正坤 ² ; 路扬 ² ; 张佳诗 ² ;

作者机构： 1.东北农业大学园艺学院

2.吉林省农业科学院

3.吉林农业大学生命科学院

关键词： 膦丝菌素乙酰转移酶;bar基因;蛋白表达;活性;抗体制备

期刊名称： 细胞与分子免疫学杂志

ISSN： 1007-8738

年卷期： 2013 年 29 卷 05 期

页码： 500-503

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的表达有生物活性的膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),制备PAT蛋白单克隆抗体(mAb)。方法通过PCR克隆bar基因编码区全长,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28-bar并转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子亲和层析纯化PAT蛋白,分析PAT蛋白活性。免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾脏与Sp2/0细胞融合,经间接ELISA筛选分泌抗PAT蛋白抗体杂交瘤细胞。结果在大肠杆菌中以可溶形式表达出重组PAT蛋白,纯化的重组PAT蛋白具有乙酰转移酶活性,制备了9株抗PAT蛋白mAb。结论表达的PAT蛋白可以用于除草剂解除剂研究,制备的mAb可能用于转基因产品的检测研究。