文献类型： 中文期刊
作者： 张雪寒 1 ; 何孔旺 1 ; 赵攀登 1 ; 栾晓婷 1 ; 叶青 1 ; 温立斌 1 ; 李彬 1 ; 王小敏 1 ; 郭容利 1 ; 倪艳秀 1 ; 周俊明 1 ; 俞正玉 1 ; 茅爱华 1 ; 吕立新 1 ;
作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心
关键词： 肠出血性大肠杆菌O157∶H7;flic基因;表达;小鼠
期刊名称： 江苏农业学报
ISSN： 1000-4440
年卷期： 2011 年 27 卷 05 期
页码： 1021-1025
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌。鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic。该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EHEC O157∶H7疫苗的研制提供候选抗原。PCR扩增到flic基因538～1 483bp的可变区,成功克隆入冷诱导表达载体pColdⅠ中,构建重组表达质粒。重组菌BL21(pCold I-flic)0.5 mmol/LIPTG过夜诱导,SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。Balb/c小鼠免疫和攻毒试验评价重组H7蛋白的免疫原性。结果显示:H7基因(flic)片段945 bp在pColdⅠ中成功表达,大小为31 000,能够与天然EHEC O157∶H7全抗血清反应;免疫小鼠存活率可以达到80%,而非免疫小鼠存活率仅为20%;免疫组粪便排菌数量显著低于对照组(P<0.05)。以上结果说明,H7鞭毛的可变区与菌体黏附密切相关,并且其诱导产生的抗体具有一定的抑制黏附作用,可以作为亚单位疫苗研制的候选抗原,在EHEC O157∶H7早期黏附时,协同Ⅲ型分泌系统蛋白降低菌体在肠道内的黏附。
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