文献类型： 中文期刊

作者： 吴靖 ¹ ; 许健 ² ; 黄秀芬 ² ; 沈俊俊 ² ; 何后军 ² ; 李永清 ³ ;

作者机构： 1.江西农业大学动物科学技术学院;北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

2.;江西农业大学动物科学技术学院;北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

3.;江西农业大学动物科学技术学院;北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室;

关键词： 牛传染性鼻气管炎病毒;囊膜糖蛋白gD;单链抗体;杆状病毒表达系统

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2017 年 08 期

页码： 2475-2482

收录情况： 北大核心

摘要： 为了获得具有生物学活性的牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD蛋白特异性单链抗体,试验采用PCR方法扩增杂交瘤细胞的cDNA单链抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,通过重叠延伸PCR及Linker序列获得完整的单链抗体基因,将单链抗体基因克隆至杆状病毒载体pFB-LICBse中,构建重组转移载体pFB-VH-VL,将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒rBacmid-VHVL,将重组杆粒rBacmid-VH-VL转染至Sf9细胞中获得携带单链抗体基因的重组杆状病毒。该重组杆状病毒在Sf9细胞中表达了分子质量约为30ku的单链抗体蛋白。Western blotting结果显示,重组单链抗体蛋白能被His标签抗体特异性结合,也能特异性结合gD蛋白。间接免疫荧光试验结果显示,该单链抗体蛋白能够识别感染牛肾细胞MDBK中的IBRV。本研究在昆虫细胞中成功表达了具有识别IBRV的gD蛋白特异性单链抗体,为牛传染性鼻气管炎的诊断与治疗奠定了基础。