文献类型： 中文期刊

作者： 汪伟 ¹ ; 何孔旺 ¹ ; 倪艳秀 ¹ ; 周俊明 ¹ ; 张雪寒 ¹ ; 俞正玉 ¹ ; 吕立新 ¹ ; 茅爱华 ¹ ; 温立斌 ¹ ; 王小敏 ¹ ; 李彬 ¹ ; 郭容利 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 猪链球菌2型;粘附相关因子;荧光定量PCR

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2014 年 03 期

页码： 560-566

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设计特异性引物,提取SS2总RNA,经RT-PCR扩增和克隆了各粘附相关因子的核苷酸片段,以构建含有各自引物扩增序列的重组质粒,建立检测各粘附相关因子SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数的对数与荧光信号达到所设定荧光阈值所经历的循环数(Ct)之间线性关系好,相关系数均达到0.995以上;扩增产物形成单一的特异性熔解峰;初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝数;组内变异系数小于2%,说明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。