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川续断ISSR反应体系的建立与优化

文献类型： 中文期刊

作者： 卢超 1 ; 艾伦强 1 ; 张美德 1 ; 何银生 1 ; 刘海华 1 ;

作者机构： 1.湖北省农业科学院中药材研究所湖北省农业科技创新中心中药材研究分中心湖北省中药材规范化种植(GAP)工程技术研究中心

关键词： ISSR;分子标记;川续断;体系优化

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2017 年 15 卷 09 期

页码： 3579-3585

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用两轮混合均匀设计的方法,研究引物、2×Taq master mix、模板DNA以及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响,在此基础上获得优化的川续断ISSR反应体系,为后续开展川续断的遗传多样性分析奠定基础。试验显示川续断ISSR-PCR最佳反应体系为:在18μL的反应体系中含有2×Taq Master Mix 10.44μL,模板DNA 45 ng,引物0.35μmol/L。在此基础上,从100条引物中筛选出5条扩增较稳定、多态性丰富的引物,随后进行的温度梯度PCR实验发现引物最佳退火温度介于45℃~58℃之间。该试验表明采用混合均匀设计和单因素试验相结合的方法,可以减少实验处理次数,快速建立ISSR反应体系,经过对9份川续断种质资源进行ISSR扩增检测,证明该体系稳定可靠,可用于川续断遗传多样性分析。

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