文献类型： 中文期刊

作者： 王元元 ¹ ; 刘姣 ¹ ; 王硕 ¹ ; 符少萍 ¹ ; 李瑞梅 ¹ ; 姚远 ¹ ; 胡新文 ¹ ; 郭建春 ¹ ;

作者机构： 1.海南大学热带农林学院;中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室

关键词： 木薯;AT-hook;基因克隆;原核表达;条件优化

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2019 年 05 期

页码： 1430-1437

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： AT-hook是一类含有AT-hook基序的核定位蛋白,被命名为AHL蛋白(AT-hook nuclear localized proteins),在植物生长发育、器官建成以及对激素信号和逆境胁迫响应中起重要作用。本研究通过RT-PCR克隆获得木薯MeAHL31基因,全长为1 189 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 014 bp,编码337个氨基酸,蛋白质分子量为35.69 k D,理论等电点为5.55,GRAVY为-0.74,是一个不稳定的亲水性蛋白,在128～264 aa区间存在一个AT-hook蛋白的保守结构域PPC domain,属于AT-hook蛋白家族。我们分别将全长MeAHL31(1～1 014)和MeAHL31 (370～742)基因片段构建到pET28a原核表达载体和含麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein, MBP)标签的pET28a-MBP载体上,并转化至E. coli BL21 (DE3)中进行诱导表达和表达条件优化。结果表明,最佳诱导表达条件是OD600=0.6,IPTG浓度为1.0 mmol/L,15℃培养16 h;含MBP融合伴侣的pET28a-MBP载体更有利于Me AHL31蛋白的可溶性表达;在同种载体中预测可溶性高的MeAHL31(370～742)区段序列较MeAHL31 (1～1 014)全长基因的可溶性蛋白表达水平更高。本研究优化高效诱导表达条件获得MeAHL31融合蛋白,为探究MeAHL31基因的生物学功能提供理论依据。