文献类型： 中文期刊

作者： 汤先泽 ¹ ; 刘伟 ² ; 皮雄娥 ² ; 尹业师 ² ; 王欣 ² ; 刘新利 ¹ ;

作者机构： 1.齐鲁工业大学

2.浙江省农业科学院

关键词： 磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C;克隆表达;乳酸乳球菌;GPI锚定蛋白

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2016 年 28 卷 04 期

页码： 640-646

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据乳酸乳球菌密码子的偏好性,在不改变编码蛋白的基础上,优化设计并合成枯草芽孢杆菌磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C基因,将其与大肠埃希菌-乳酸乳球菌穿梭质粒p AMJ399连接,构建重组质粒p AMJ399-PIPLC,并电转化至乳酸乳球菌中进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示:重组蛋白以可溶性蛋白的形式分泌于胞外,分子质量约35 ku,与预期蛋白大小一致。重组蛋白在PI-李斯特氏菌显色平板上显现明显的乳白色晕圈,证明重组蛋白具有酶活性,磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)在重组乳酸乳球菌中成功获得表达。通过优化培养条件,以2%转接量,在含有1%红霉素抗性的GM17液体培养基中,于32℃静止培养24 h,测得培养基上清液中PI-PLC的浓度为1.092μg·m L-1。