文献类型： 中文期刊

作者： 张飘 ¹ ; 罗引幸 ² ; 李涛 ³ ; 杨霞 ¹ ; 曾茂芹 ¹ ; 刘妍罕 ¹ ; 张扬子 ⁴ ; 杨颖 ⁵ ; 温贵兰 ⁵ ; 程振涛 ⁵ ; 文明 ⁵ ;

作者机构： 1.贵州大学动物科学学院

2.贵州省牛羊产业协会

3.贵州省动物疫病预防控制中心

4.贵州省畜牧兽医研究所

5.贵州大学动物科学学院  

关键词： 鸭肠炎病毒;鸭胚成纤维细胞;NF-κB信号通路;激活剂LPS;抑制剂SN50;增殖

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2021 年 003 期

页码： 302-309

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究NF-κB信号通路对鸭肠炎病毒（DEV）增殖的影响,本实验分别以不同终浓度的NF-κB信号通路激活剂LPS（2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL）和抑制剂SN50（25.0μg/mL、50.0μg/mL、75.0μg/mL）处理鸭胚成纤维（DEF）细胞后,采用CCK8法分析LPS或SN50对DEF细胞活性影响;利用不同浓度的LPS或SN50预处理DEF细胞4 h后,再于12 h¹20 h后收获细胞和上清液（未感染DEV）;上述经LPS或SN50预处理细胞4 h后接种DEV（MOI 0.01）,12 h¹20 h后（每间隔12 h）分别收获细胞及上清液,采用荧光定量PCR方法分别检测上述未感染和感染DEV的DEF细胞中NF-κB1基因和DEV NP基因的转录水平;采用ELISA方法分别检测上述未感染和感染DEV的DEF细胞上清液中NF-κB信号通路关键因子（IL-1β、IL-6和MyD88）的表达水平。结果显示:不同浓度的LPS和SN50处理对DEF细胞均无明显毒性作用。荧光定量PCR结果显示,经不同浓度LPS预处理,均能有效提高DEF细胞中NF-κB1基因的转录水平,其中4.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因转录水平最高;而在LPS预处理再感染DEV后,4.0μg/mL LPS和6.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因转录水平整体上调（p<0.05）,2.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因的转录水平整体下调（p<0.05）;不同浓度的SN50预处理后,未感染和感染DEV的DEF细胞中,均以50.0μg/mL SN50处理的细胞中NF-κB1基因的转录水平下调效果最好（p<0.05）。LPS预处理DEF细胞后感染DEV,12h⁸4 h DEV NP基因的转录水平均受到明显抑制（p<0.01）,84 h后2.0μg/mL和6.0μg/mL LPS均会促进DEV NP基因的转录水平;而经SN50预处理DEF细胞后感染DEV,细胞中DEV NP基因的转录水平均显著下降（p<0.01）。ELISA结果显示,经LPS预处理后,不感染或感染DEV,DEF细胞中IL-6表达量整体稍呈下降趋势（p>0.05）,而IL-1β和MyD88的表达则呈无规律变化;经SN50预处理后不感染或感染DEV,DEF细胞中IL-1β、IL-6和MyD88的表达均无规律变化。以上研究结果表明,不同浓度LPS均可促进正常DEF细胞中NF-κB1基因的转录,而DEV则可以阻断低浓度LPS（2.0μg/mL）的这种促进作用。不感染或感染DEV,SN50均于高浓度（50μg/mL和75μg/mL）时才能有效降低NF-κB1基因的转录水平;不同浓度的LPS或SN50均对NF-κB通路关键因子的表达基本无影响;LPS在DEV感染后期才能促进其增殖,而SN50则可以有效抑制DEV的增殖。本研究为阐明NF-κB信号通路与DEV之间的相互作用关系奠定了实验基础。。