文献类型： 中文期刊

作者： 陈柳 ¹ ; 倪征 ¹ ; 余斌 ¹ ; 华炯钢 ¹ ; 叶伟成 ¹ ; 云涛 ¹ ; 刘可姝 ¹ ; 朱寅初 ¹ ; 张存 ¹ ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 鸭瘟病毒;鸭坦布苏病毒;E蛋白;细菌人工染色体;病毒载体;启动子

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2020 年 53 卷 024 期

页码： 5125-5134

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [背景]鸭瘟和鸭坦布苏病毒是鸭的两种重要传染病,鸭瘟属于疱疹病毒科,具有开发成病毒载体的优势.为了优化鸭坦布苏病毒E基因在重组鸭瘟病毒载体中的表达,之前探讨了不同形式鸭坦布苏病毒E蛋白在重组鸭瘟病毒载体中的表达,发现以鸭为宿主进行密码子优化的E基因C端截短形式(E451-dk,简称为Es)表达量最高.[目的]探讨不同启动子对Es在重组鸭瘟病毒载体中表达的影响,为鸭瘟病毒—坦布苏病毒二联苗的研制奠定基础.[方法]将pCAG、pSV40、pRSV、p1.8k(MDV)和pgB(MDV)启动子通过常规基因克隆的方法替换转移载体pEP-BGH-Es中的pCMV启动子,构建不同启动子调控Es表达的重组表达框pro-Es-BGH-pA.在鸭瘟病毒(DEV)疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,将5个重组表达框分别通过"Red E/T两步重组"克隆至pDEV-EF1突变体的US7和US8基因之间,构建了携带不同启动子调控的Es突变体克隆pDEV-pro-Es.用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)拯救获得相应重组病毒rDEV-pro-Es,并对重组病毒感染细胞蚀斑大小和Es蛋白表达情况进行测定.[结果]将重组突变体克隆转染细胞拯救获得了5株重组病毒rDEV-pro-Es.Western blotting分析表明外源蛋白Es在pRSV调控下表达量最高,其表达量较rDEV-Es提高了169.12%.[结论]完成了Es在重组鸭瘟病毒载体中高效表达启动子的筛选,获得了一种调控Es高效表达的启动子pRSV.同时也获得了一株高效表达鸭坦布苏病毒外源基因Es的重组鸭瘟病毒rDEV-pRSV-Es.