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玉米淀粉分支酶SBEⅡb基因片段酵母双杂交诱饵载体的构建及检测

文献类型： 中文期刊

作者： 崔喜艳 1 ; 刘晶 2 ; 刘忠野 3 ; 韩琳 2 ;

作者机构： 1.吉林农业大学农学院

2.吉林农业大学生命科学学院

3.吉林农业大学生命科学学院东北师范大学草地研究所/植被生态科学教育部重点实验室

关键词： 玉米;诱饵载体;SBEⅡb;酵母双杂交

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2012 年 28 卷 15 期

页码： 24-30

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探寻玉米淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBEⅡb)与其互作蛋白的作用位点,构建了酵母双杂交诱饵载体。根据CDD和NCBI对SBEⅡb蛋白氨基酸序列的分析,确定玉米SBEⅡb的功能域及非功能域,PCR扩增功能域及非功能域基因的目的片段,经回收纯化,用相同的限制性内切酶将其与载体pGBKT7进行双酶切后,分别将目的基因片段与载体pGBKT7进行连接。构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SBEⅡb-X(X=1,2,3,4,5,6),转化酵母菌AH109的菌液,OD600值在0.8以上,证明诱饵载体pGBKT7-SBEⅡb-X对酵母菌AH109没有毒性作用;转化诱饵载体后的酵母菌AH109,在SD/-Trp/X-α-Gal平板上长出白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade/-Trp/X-α-Gal平板上不能生长,排除了pGBKT7-SBEⅡb-X具有自激活宿主菌AH109的作用。构建的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SBEⅡb-X(X=1,2,3,4,5,6),其表达对酵母细胞无毒性及对报告基因无自激活作用,可为下一步分析SBEⅡb与其互作蛋白的作用位点奠定基础。

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