文献类型： 中文期刊

作者： 江丹丹 ¹ ; 林昶 ¹ ; 黄志坚 ¹ ; 肖世峰 ¹ ; 王劭 ¹ ; 林锋强 ¹ ; 程晓霞 ¹ ; 朱小丽 ¹ ; 陈秀琴 ¹ ; 董慧 ¹ ; 陈少莺 ¹ ; 陈仕龙 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所;福建农林大学动物科学学院(蜂学学院);三明市绿色食品发展中心;福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

关键词： 鸭腺病毒B血清1型;鸭腺病毒B血清2型;fiber基因;fiber1基因;双重PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 44 卷 008 期

页码： 855-860

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1).为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法,本研 究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2fiber1基因序列特征,分别设计了 2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法.结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1℃,最适引物浓度为0.16 μmol/L;利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测,结果显示,该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增,对其他鸭临床常见病原均无扩增,特异性较强.将DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板,利用该双重PCR方法检测,结果显示,该方法对DAdV-B1fiber和DAdV-B2fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μ.L,对DAdV-B2的最低检出滴度为1×101TCID50,敏感性较高.批内和批间的重复性试验检测结果均一致,重复性好.利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测,结果显示二者的符合率为100%,其中DAdV-B2的阳性率为79.7%(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7%(3/64).以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好,为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段.