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A型口蹄疫VP1基因的原核表达及纯化

文献类型： 中文期刊

作者： 刘清源 1 ; 向华 2 ; 黄元 3 ; 陈晶 1 ; 向蓉 4 ;

作者机构： 1.华南农业大学兽医学院

2.中国科学院微生物研究所

3.广东省农科院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室

4.广东省农科院动物卫生研究所广东省兽医公共卫生公共实验室

关键词： 口蹄疫病毒(FMDV);VP1基因;克隆表达;鉴定;纯化

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2016 年 09 期

页码： 173-176

收录情况： 北大核心

摘要： 为了研究A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白的免疫原性,试验采用PCR方法从口蹄疫阳性质粒p MD-18-P1中扩增得到目的基因VP1,与原核表达载体p ET-28a连接,构建重组质粒p ET-28a-VP1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,筛选的阳性菌落用IPTG诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,通过Western-blot分析蛋白的免疫原性,并用镍亲和树脂纯化鉴定后的重组蛋白。结果表明:重组质粒p ET-28a-VP1经PCR及酶切鉴定证明构建正确;重组质粒能够在大肠杆菌中大量表达,表达产物的分子质量大小约为26 ku,且能被口蹄疫阳性血清识别;镍亲和树脂纯化的蛋白条带单一。说明该蛋白具有免疫学活性,且纯度较高。

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