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Ⅰ型鸭肝炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建与分析

文献类型： 中文期刊

作者： 云涛 1 ; 倪征 1 ; 刘光清 2 ; 余斌 1 ; 陈柳 1 ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所

2.中国农业科学院上海兽医研究所

关键词： Ⅰ型鸭病毒性肝炎;全长cDNA克隆;感染性克隆

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2010 年 38 卷 05 期

页码： 27-31

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】建立Ⅰ型鸭病毒性肝炎(Duck hepatitis virus,DHV)的反向遗传系统。【方法】根据Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)ZJ-V/2006株全基因组序列设计并合成5对特异引物,进而应用RT-PCR技术分5段扩增了DHV全基因组cDNA。将扩增的cDNA重叠片段A、B、C和DE片段分别克隆到载体pBluescriptⅡKS(+)中,获得了DHV-ⅠZJ-V/2006株全长基因组cDNA克隆pBLDHV。在扩增5′末端时,引入ApaⅠ酶切位点和SP6启动子序列;在基因组3′末段PolyA尾引入NruⅠ酶切位点,以供cDNA模板的线性化之用。【结果】核酸序列分析表明,DHV-ⅠZJ-V/2006株基因组全长为7 711个核苷酸,与DHV-ⅠZJ-V BHK-21细胞分离株的同源性为99.9%;全长基因组中有6个核苷酸发生突变,均未导致对应的氨基酸发生改变,为沉默突变。【结论】成功构建了DHV-ⅠZJ-V/2006株基因组全长cDNA。

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[2]缺失gE基因的牛Ⅰ型疱疹病毒构建及其体外增殖特性比较. 尹龙勃,尹文玲,叶伟成,孙学强,杨鸣琦,王一成,袁秀芳,张存. 2010

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