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猪轮状病毒G1P[7]株分离鉴定及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 李素芬 1 ; 汤学超 1 ; 周金柱 1 ; 王丹丹 1 ; 朱雪蛟 1 ; 陶然 1 ; 李运川 1 ; 郭容利 1 ; 张雪寒 1 ; 李彬 1 ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院;江苏省农业科学院兽医研究所

关键词： 猪轮状病毒;分离鉴定;基因型;免疫原性,多克隆抗体

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2024 年 56 卷 004 期

页码： 101-107

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在明确猪场腹泻原因并分离猪轮状病毒(PoRV).采集腹泻猪粪便,经RT-PCR检测为阳性的样品接种于单层细胞,通过细胞病变(CPE)和间接免疫荧光(IFA)来检测病毒增殖;RT-PCR扩增VP4 和VP7 基因并测序以确定G/P基因型,生物信息学软件分析VP4 和VP7 基因的遗传进化特征;传代病毒灭活后制苗接种家兔制备多克隆抗体,测定中和抗体,并经Western blot和IFA鉴定其特异性.结果:猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、伪狂犬病毒(PRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)均为阴性,只有PoRV为阳性;过滤粪便样接种单层MA104 细胞,连续传5 代均可观察到以细胞圆缩、最后瓦解脱落为特征的CPE,IFA检测到PoRV的特异性荧光,表明病毒分离成功,命名为JSNJ2019;分离株连续传代,病毒滴度逐步升高,介于105~106.5 TCID50/mL;分离株JSNJ2019 为G1P[7]基因型;3 次免疫后家兔血清的中和抗体滴度最高可达 211,Western blot出现特异性条带且IFA荧光亮而特异.本研究成功分离PoRV JSNJ2019(G1P[7])且免疫原性良好,制备的多克隆抗体特异性强,为研究PoRV致病机制奠定基础.

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[2]检测猪轮状病毒的一种新方法——夹心PPA-ELISA. 侯继波,何家惠,丁再棣,林继煌. 1993

[3]检测猪流行性腹泻病毒的R-PCR方法的建立. 倪艳秀,何孔旺,俞正玉,郭蓉利,吕立新,陈兆霞. 2004

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