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冬瓜均一化酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 陈凤 1 ; 闫晋强 2 ; 李梅兰 1 ; 江彪 2 ;

作者机构： 1.山西农业大学园艺学院

2.广东省农业科学院蔬菜研究所/广东省蔬菜新技术研究重点实验室

关键词： 冬瓜;DSN均一化;cDNA文库;酵母文库

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2021 年 48 卷 008 期

页码： 58-64

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]通过构建冬瓜酵母双杂交cDNA文库,为开展冬瓜基因功能研究提供技术支撑.[方法]以冬瓜高代自交系B227(冬瓜参考基因组测序材料)的根、茎、叶、雄花、嫩果等不同组织为材料,利用CTAB法提取RNA、分离纯化获得mRNA并进行双链cDNA合成和DSN均一化处理后,与pDONR222载体进行BP重组反应,转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建初级文库;提取初级文库质粒,与pGADT7-DEST载体通过LR重组反应,转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建酵母杂交cDNA次级文库.利用倍比稀释法计算文库库容量,并通过菌落PCR计算文库重组率和插入片段的大小.[结果]初级文库库容量为8.24×106 CFU,冬瓜均一化酵母双杂交次级cDNA文库库容量为1.03×107 CFU;次级文库中插入片段主要集中在850~3000 bp,重组率为100%,具有良好的多态性.[结论]成功构建了冬瓜均一化酵母双杂交cDNA文库,文库完整性较高、质量较好,符合酵母双杂交实验要求,可应用于后续相关基因产物互作蛋白的筛选等试验,为冬瓜基因功能研究提供前提条件.

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