文献类型： 中文期刊

作者： 李科茫 ¹ ; 周金柱 ² ; 周俊明 ² ; 牛贝贝 ² ; 武琦 ² ; 郭容利 ² ; 张雪寒 ² ; 朱雪蛟 ² ; 李彬 ² ; 粟硕 ¹ ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院

2.江苏省农业科学院兽医研究所

关键词： 猪A群轮状病毒;单克隆抗体;VP6蛋白

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2023 年 004 期

页码： 79-85

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在通过RT-PCR扩增猪A群轮状病毒（group A rotavirus, RVA）VP6基因节段，并克隆至pET28a-SUMO,构建原核表达载体pET28a-SUMO-VP6,将该重组载体转化至大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导、镍柱亲和层析纯化以获得重组蛋白SUMO-VP6,Western blot验证该重组蛋白能够与小鼠抗轮状病毒血清反应。将该重组蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞，Western blot和间接免疫荧光验证阳性杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体与RVA的反应性。经3轮亚克隆最终获得一株能稳定分泌针对VP6蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株5G9,其分泌的单抗亚类为IgG1,轻链类型为Kappa,制备的小鼠腹水效价可达1∶4 096 000,能够与不同基因型的RVA反应，同时不与常见的猪腹泻相关病毒反应，为未来猪RVA相关基础研究、临床血清学检测方法的开发奠定了基础。