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用Protein A亲和层析法快速分离纯化鲫血清IgM方法的建立和应用

文献类型： 中文期刊

作者： 吴光辉 1 ; 王庆 1 ; 巩华 1 ; 石存斌 1 ; 李华 2 ; 吴淑勤 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院

2.大连海洋大学

关键词： 鲫;ProteinA;IgM;纯化;抗体检测

期刊名称： 大连海洋大学学报

ISSN： 1000-9957

年卷期： 2010 年 25 卷 03 期

页码： 47-51

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用Protein A亲和层析法对鲫Carassius auratus血清中的IgM进行快速分离纯化,所得产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blotting)进行分析检测。结果表明:采用Protein A亲和层析法可以很好地分离到高纯度的鲫血清IgM,电泳条带中重链和轻链清晰可辨,重链、轻链的相对分子质量分别为85 000、25 000左右,无明显杂带;利用纯化的鲫血清IgM免疫小鼠,获得了高效价抗IgM抗血清,可以特异性识别鲫血清和黏液中IgM重链。应用间接ELISA方法对浸泡免疫后的鲫血清和皮肤黏液中抗体的动态进行检测,结果显示:鲫皮肤黏液中的抗体滴度在免疫后第6天达到峰值,血清中抗体滴度在免疫后第15天达到峰值,前者高峰期出现较早,但持续时间短,后者高峰期出现较晚,但持续时间较长。本试验中所建立的Protien A亲和层析法为鱼类抗体制备、病原检测及免疫学相关研究提供了一种便捷的方法。

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