文献类型： 中文期刊

作者： 陈萌萌 ¹ ; 潘渊婷 ¹ ; 范志宇 ¹ ; 胡波 ¹ ; 宋艳华 ¹ ; 魏后军 ¹ ; 仇汝龙 ¹ ; 朱伟峰 ¹ ; 徐为中 ¹ ; 王芳 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 兔源抗凋亡蛋白Bcl-2;原核表达;亲和层析;多抗制备

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2019 年 06 期

页码： 1397-1401

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a(+)载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21(DE3),筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Western blot鉴定后免疫小鼠。结果显示,成功扩增Bcl-2编码序列并构建了pET-32a-Bcl-2表达载体;SDS-PAGE结果显示,在16℃,5 h,0.5 mmol/L IPTG的表达条件下,重组蛋白Bcl-2能够高效可溶性表达;Western blot结果表明纯化后的表达产物为高纯度的Bcl-2重组蛋白,将该蛋白质免疫小鼠后获得了特异性抗体,该抗体能够特异性识别重组Bcl-2蛋白,并应用该抗体鉴定RK13-B细胞中Bcl-2蛋白的过表达。