文献类型： 中文期刊

作者： 邓晓辉 ¹ ; 陈柳 ² ; 叶伟成 ² ; 李军星 ² ; 崔尚金 ³ ; 余斌 ² ; 云涛 ² ; 崔言顺 ¹ ; 孙元 ³ ; 仇华吉 ³ ; 张帅 ¹ ; 张存 ² ;

作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院

2.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

关键词： PRV感染性克隆;细菌人工染色体;猪细小病毒;猪圆环病毒2型

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2012 年 34 卷 04 期

页码： 251-256

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap(V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-ΔgE和pPRV-ΔgE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-ΔgE和rPRV-ΔgE。Western blot分析表明rPRV-V2C-ΔgE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64 ku和28 ku两个片段。重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C-ΔgE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖。本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础。