文献类型： 中文期刊
作者： 孙效文 1 ; 贾智英 1 ; 魏东旺 1 ; 鲁翠云 1 ; 梁利群 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所
关键词： 磁珠富集;小片段克隆;鲤;微卫星
期刊名称： 中国水产科学
ISSN： 1005-8737
年卷期： 2005 年 12 卷 02 期
页码： 126-132
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 用2种方法克隆黑龙江鲤(Cyprinus(Cyprinus)carpiohaematopterus)的微卫星序列。这2种方法分别是:①经典的小片段DNA克隆库,用末端标记的[γ-32]ATP的CA重复序列为探针筛选;②将酶切获得的小片段DNA用结合有磁珠的并连接有15个CA重复序列的生物素进行富集,获得的含有CA重复的DNA片段并经过两次PCR扩增再克隆的方法获得富集微卫星片段的克隆库。从前一个方法的克隆库中筛选2000个菌落,获得阳性克隆45个,有22个含有微卫星,完美型的占63 6%,非完美型的占22 7%,混合型的占13 7%,重复次数超过10的有9个,占40 9%;从方法②的克隆库中筛选2600个菌落,获得阳性克隆1300个,测序其中的390个克隆,微卫星314个,完美型的占79 0%;非完美型的占14 3%;混合型的占6 7%,重复次数超过10的有293个,占93 3%。结果表明,用生物素结合磁珠富集法克隆微卫星效率高,成本低,所获微卫星质量高,是一种值得推荐的微卫星制备方法。
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