文献类型： 中文期刊
作者： 李文良 1 ; 毛立 1 ; 张纹纹 1 ; 王小敏 1 ; 茅爱华 1 ; 甘源 1 ; 江杰元 1 ;
作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心
关键词： PCV-2;Rep蛋白;原核表达;ELISA
期刊名称： 中国兽医学报
ISSN： 1005-4545
年卷期： 2013 年 33 卷 08 期
页码： 1154-1158
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 采用PCR方法扩增猪圆环病毒2型(PCV-2)Rep蛋白基因,克隆入原核表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21构建重组表达菌,经SDS-PAGE检测目的蛋白得到成功表达,采用His标签单抗和PCV-2阳性猪血清进行Western blot鉴定表明重组蛋白具有良好的抗原性。利用纯化的重组蛋白rRep作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了间接ELISA抗体检测方法。抗原最适包被质量浓度为1mg/L(0.1μg/孔),待检血清最适稀释度为1∶100,作用时间为1h,酶标抗体最适稀释度为1∶3 000。用该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)阳性血清,结果均为阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为<5%和<10%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用rRep-ELISA对113份血清样品进行检测,与rCap-ELISA结果比较,rRep-ELISA检测阳性率为50.44%(57/113),略低于后者的54.87%(62/113),2种方法检测符合率为88.5%(100/113),具有较好的一致性。这为PCV-2感染的流行病学调查和新型ELISA诊断试剂盒的研制奠定基础。
- 相关文献
[1]猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ主要抗原表位区原核表达及其间接ELISA方法的建立(英文). 吴东,倪艳秀,何孔旺,李郁. 2014
[2]猪圆环病毒2型ORF1部分位点突变对病毒复制能力的影响. 李荷然,肖琦,温立斌,朱雪蛟,芮荣,何孔旺. 2024
[3]应用猪瘟抗原/血清ELISA测定猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量. 唐红慧,王金虎,周勇歧,冯志新,张道华. 2010
[4]Bioaccumulation of microcystin and its oxidative stress in the apple (Malus pumila). Chen, Jianzhong,Zhang, Haiyang,Wang, Chenyi,Zhou, Guoqing,Han, Zhiping,Chen, Jianzhong,Liu, Zhili,Dai, Jian. 2010
[5]Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for podophyllotoxin. Xu, DM,Yu, XY,Liu, YQ,Feng, JT,Pan, LG,Liu, XJ,He, J,Zhang, X. 2005
[6]Enzyme-Linked Immunosorbent-Assay for Deoxynivalenol (DON). Ji, Fang,Li, Hua,Xu, Jianhong,Shi, Jianrong. 2011
[7]Development and partial validation of a recombinant E2-based indirect ELISA for detection of specific IgM antibody responses against classical swine fever virus. Li, Wenliang,Mao, Li,Yang, Leilei,Jiang, Jieyuan,Zhou, Bin. 2013
[8]Development and application of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay using recombinant truncated Cap protein for the diagnosis of porcine circovirus-like virus P1. Wen, Li-bin,Wen, Shi-fu,He, Kong-wang,Wen, Li-bin,Wen, Shi-fu,He, Kong-wang,Wen, Li-bin,Wen, Shi-fu,He, Kong-wang. 2016
[9]Selection and application of broad-specificity human domain antibody for simultaneous detection of Bt Cry toxins. Xu, Chongxin,Zhang, Xiao,Liu, Yuan,Hu, Xiaodan,Zhong, Jianfeng,Zhang, Cunzheng,Liu, Xianjin,Liu, Xiaoqin.
[10]Construction of an Immunized Rabbit Phage Display Library for Selecting High Activity against Bacillus thuringiensis Cryl F Toxin Single-Chain Antibodies. Xu, Chongxin,Zhang, Cunzheng,Zhong, Jianfeng,Zhang, Xiao,Liu, Yuan,Liu, Xianjin,Hu, Hui,Luo, Shimin,Liu, Xiaoqin.
[11]抗苏云金芽孢杆菌Cry1B毒蛋白质单链抗体的筛选与鉴定. 徐重新,张霄,刘媛,王耘,张存政,刘贤进. 2012
[12]类志贺毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)基因表达及间接ELISA方法的建立. 王警,张雪寒,郭芸芸,张碧成,吴庆侠,何孔旺. 2019
[13]传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法的建立. 王晓丽,王永山,欧阳伟,夏兴霞,潘群兴,毕振威,诸玉梅. 2018
[14]ELISA检测方法中最佳封闭液和样品稀释液的筛选研究(英文). 杜改梅,刘茂军,甘源,韦艳娜,武昱孜,邵国青. 2013
[15]传染性法氏囊病病毒vp3基因在昆虫细胞中的表达及其ELISA抗原反应性的分析. 刘华洁,杜希宁,梅永杰,王晓丽,欧阳伟,毕振威,潘群兴,姚火春,王永山. 2015
[16]应用猪瘟抗原/血清ELISA测定猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量. 唐红慧,杜希珍,刘大伟,王金虎,冯志新. 2010
[17]诺维氏梭菌α毒素单克隆抗体的制备与鉴定. 孟德志,邢斌,翁鸿宇,王秀媛,王芳,杨玲玲,柴同杰,韦良孟,戴培强. 2022
[18]单克隆抗体间接竞争ELISA测定水体中氟虫腈. 余向阳,颜春荣,刘贤进. 2004
[19]A组轮状病毒检测方法的研究及初步应用. 李保仝,杨毓华,胡进军,李芳秋,方友文,何孔旺,林继煌. 1991
[20]氟虫腈单克隆抗体制备及其性能分析. 颜春荣,刘贤进,余向阳,张存政,王冬兰,廖海丰,韩召军. 2003
作者其他论文 更多>>
-
绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白原核表达及ELISA方法建立
作者：陈思宇;张梦洁;田睿;陈益;刘镝钺;李文良;毛立;程子龙;杨蕾蕾;孙敏;张纹纹;杜改梅;储岳峰;王金泉;刘茂军
关键词：绵羊肺炎支原体;EF-Tu蛋白;原核表达;间接ELISA
-
江苏某牛场犊牛呼吸道疾病原检测与牛支原体的分离鉴定分析
作者：张洪菊;程子龙;韦艳娜;毛立;刘茂军;牛家强;冯志新;李文良
关键词：牛;呼吸道病;牛支原体;分离鉴定;药敏试验;进化分析
-
一株羊冠状病毒的分离鉴定及全基因组序列分析
作者：余秋蓉;蔡旭航;何艺;李基棕;毛立;许信刚;李彬
关键词：羊冠状病毒;分离鉴定;全基因组测序;进化分析
-
牛病毒性腹泻病毒1型E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法的建立
作者：刘鑫欢;张纹纹;程子龙;金前跃;郭志睿;郭大伟;龙云凤;杨蕾蕾;刘茂军;白娟;李文良
关键词：牛病毒性腹泻病毒;E2蛋白;抗体;金-银纳米颗粒;侧流免疫层析方法
-
猪呼吸道病主要致病菌对常用抗生素的耐药性分析
作者：刘余;解悦;刘启宏;郭春艳;廖洪;袁方;杨珊珊;毛立
关键词：抗生素;猪;呼吸道致病菌;耐药性
-
牛冠状病毒家兔源多克隆抗体的制备与应用
作者：刘筱筱;余秋蓉;李霞;毛立;许信刚;李彬
关键词：牛冠状病毒;多克隆抗体;双抗体夹心ELISA;鉴定
-
新疆北疆区域羊肠道病毒分子流行病学调查及遗传进化分析
作者：何艺;张明;李霞;蔡旭航;毛立;李彬
关键词：羊肠道病毒;绵羊;新疆;分子流行病学;遗传进化
