文献类型： 中文期刊

作者： 杨艳艳 ¹ ; 乔松林 ² ; 李睿 ² ; 郭军庆 ² ; 李青梅 ² ; 滕蔓 ² ; 王丽 ² ; 赵东 ² ; 李学伍 ² ; 邓瑞广 ² ; 张改平 ² ;

作者机构： 1.河南省农业科学院

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关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;免疫过氧化物酶单层细胞试验;筛选;单克隆抗体

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2019 年 003 期

页码： 217-223

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体.用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12 h后用含3%H2O2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)反应板.以100μL/孔的量将融合后继续培养10 d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察.结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色.因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体.