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磁珠富集法分离草鱼微卫星分子标记

文献类型： 中文期刊

作者： 孙效文 1 ; 鲁翠云 1 ; 梁利群 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

关键词： 磁珠富集;草鱼;微卫星分子标记

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2005 年 29 卷 04 期

页码： 52-56

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 磁珠富集法是一种快速、高效的分离微卫星分子标记的方法。本研究通过该方法分离草鱼的微卫星分子标记。将草鱼(Ctenopharyngodon idella)基因组DNA经Sau3AI酶切,回收纯化400～900bp片段,连上接头,构建“基因组PCR文库”。用生物素标记的简单重复序列(CA)15作探针与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,经一系列的洗涤过程,去除磁珠表面不含有微卫星的片段。将吸附在磁珠上的片段洗脱,PCR扩增放大,再进行克隆和测序,根据微卫星两端的保守序列设计引物,即可得到微卫星分子标记。本研究又通过同位素标记的探针(CA)15进行二次杂交筛选,获得阳性克隆132个,所得到的阳性克隆经测序,86.36%含有微卫星序列,共获得130个微卫星DNA序列。用引物设计软件PrimerPremier5.0设计引物83对。

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