文献类型： 中文期刊

作者： 李争 ¹ ; 卜昭阳 ² ; 卢晓冉 ² ; 李诗语 ² ; 郎需龙 ² ; 王兴龙 ² ; 吴大成 ² ;

作者机构： 1.吉林农业大学动物科技学院

2.吉林农业大学动物科技学院;军事医学科学院军事兽医研究所;吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;广东省农科院动物卫生研究所

关键词： 大肠埃希菌O157∶H7;多重PCR

期刊名称： 中国生物制品学杂志

ISSN： 1004-5503

年卷期： 2015 年 28 卷 09 期

页码： 956-960

收录情况： CSCD

摘要： 目的建立一种能够满足现场快速检测、完全脱离实验室仪器设备的大肠埃希菌O157∶H7多重PCR检测方法。方法利用大肠埃希菌O157∶H7抗原基因保守序列fli Ch7和rfb E设计2对引物,并对Palm PCR G1-12退火温度、循环数、引物浓度及引物最佳比例进行优化,建立微量快速检测大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行验证。取疑似病牛粪便共9份,利用粪便DNA提取试剂盒提取DNA,按照建立的PCR方法进行扩增,扩增产物经微型电泳仪电泳检测并照相。结果确定大肠埃希菌O157∶H7 PCR的最佳退火温度为54℃,循环数为25个循环,上下游引物浓度为10μmol/L,2对引物最适比为fli Ch7∶rfb E=1∶3。大肠埃希菌O157∶H7扩增产物可见625 bp(fli Ch7)和213 bp(rfb E)的特异性片段,而大肠埃希菌(ATCC25922)、猪链球菌2型、金黄葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、小肠耶尔森菌、单增李斯特菌、沙门菌的PCR检测结果均为阴性,最低扩增DNA浓度为10 pg/μl,重复扩增5次均可见目的条带。9份疑似病牛粪便样品中,共检测出7份大肠埃希菌O157∶H7阳性样品。结论建立了大肠埃希菌O157∶H7微量快速多重PCR检测方法,该方法特异性、灵敏性和重复性均良好,可在现场约1 h报告结果,对突发性传染病的防治具有重要意义。