文献类型： 中文期刊
作者： 陶洁 1 ; 廖金虎 1 ; 张倩 1 ; 张信军 1 ; 朱国强 1 ;
作者机构： 1.扬州大学兽医学院
关键词： ISG15;蛋白表达;多抗血清
期刊名称： 中国动物传染病学报
ISSN： 1674-6422
年卷期： 2015 年 23 卷 02 期
页码： 68-73
摘要： 本研究利用人重组干扰素IFNα-2A刺激牛肾细胞(Mardin-Darby bovine kidney cells,MDBK),并提取细胞总RNA。RT-PCR扩增牛源干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG 15),将其克隆入p Cold-TF表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导表达后,获得约70 k Da可溶性ISG15重组蛋白。用试剂盒对重组蛋白ISG15进行纯化回收,经BCA法测定其蛋白浓度为1 mg/m L。用纯化的ISG15重组蛋白免疫ICR小鼠,制备多克隆抗体血清,用间接ELISA方法测定多抗血清效价为1:102 400。利用Western blot进一步鉴定ISG15多抗血清,结果发现其与纯化的ISG15重组蛋白能发生特异性反应,可用于后续研究。
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