文献类型： 中文期刊

作者： 焦文强 ¹ ; 刘运超 ² ; 邢广旭 ² ; 陈鹏举 ³ ; 徐引弟 ¹ ; 王治方 ¹ ; 张青娴 ¹ ; 许峰 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院畜牧兽医研究所

2.河南省农业科学院

3.河南省现代中兽医研究院

关键词： GRP78基因;生物信息学分析;真核表达

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2021 年 004 期

页码： 1170-1178

收录情况： 北大核心

摘要： 试验旨在探究葡萄糖调节蛋白7820（glucose20regulatory20protein2078,GRP78）基因的理化性质和结构特点,阐述GRP78在猪流行性腹泻病毒复制中的分子伴侣作用和调控机制。通过RT-PCR方法扩增GRP78基因,并插入到pMD20-T20Simple载体进行克隆测序,利用生物信息学方法对其氨基酸序列、跨膜结构、糖基化位点、磷酸化位点、三级结构等进行预测和分析。将GRP78基因插入pCDNA203.1中,然后转染Vero-E6细胞。Western20blotting检测Vero-E6细胞中GRP78的表达。生物信息学分析结果表明,GRP78基因全长12096520bp,编码654个氨基酸,蛋白质分子质量为72.3320ku,理论等电点为5.07,分子式为C₃₁₈₉H₅₁₅₃N₈₆₅O₁₀₁₉S₁₃。遗传进化树分析显示,猴源GRP78基因与双峰驼、犬、猫、大猩猩、蝙蝠、狒狒、猪、马的氨基酸序列同源性为99.5%～99.8%;遗传进化分析显示,大猩猩和狒狒亲缘关系最为接近。跨膜区和信号肽预测结果显示,该蛋白存在信号肽但不存在跨膜结构。GRP78蛋白无N-糖基化修饰位点,存在6个O-糖基化位点、28个磷酸化位点,表明GRP78可能有与激酶磷酸化有关的PKC、PKA特异性蛋白激酶的结合位点,可能参与己糖代谢和单糖代谢。