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木瓜凝乳蛋白酶基因的克隆及在原核细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

作者： 蔡勤安 1 ; 于志晶 1 ; 尚丽霞 2 ; 许诺 3 ; 曾军 4 ;

作者机构： 1.吉林省农业科学院生物技术研究中心

2.吉林省农业科学院农业生物技术研究所吉林省农业科学院大豆研究所

3.吉林省农业科学院农业生物技术研究所吉林大学生命科学学院

4.中山大学药学院分子生物学实验室

关键词： 木瓜凝乳蛋白酶;基因克隆;原核表达;活性检测

期刊名称： 吉林农业科学

ISSN： 1003-8701

年卷期： 2015 年 40 卷 03 期

页码： 23-25+79

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以青番木瓜总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出木瓜凝乳蛋白酶基因CHY(chymopapain),构建带有His-tag的原核表达载体p EASY-E1-CHY。将该重组载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,重组菌株用IPTG诱导表达,在诱导6 h,IPTG浓度为0.05 mmol/L时重组蛋白表达量最高。SDS-PAGE凝胶电泳和West-ern-Blot杂交分析结果表明蛋白大小为45 k Da。用脱脂奶粉进行凝乳分析,证明此木瓜凝乳蛋白酶具有凝乳活性,此结果为今后利用生物技术进行木瓜凝乳蛋白酶工程化生产奠定了基础。

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