文献类型： 中文期刊

作者： 孟继秋 ¹ ; 胡骁飞 ² ; 王耀 ³ ; 邢云瑞 ² ; 曹金博 ² ; 陈琳琳 ² ; 孙亚宁 ² ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室

2.河南省农业科学院

3.河南科技大学食品与生物工程学院

关键词： 6-苄基腺嘌呤;6-苄基腺苷;人工抗原;ELISA;多克隆抗体

期刊名称： 河南农业科学

ISSN：

年卷期： 2021 年 005 期

页码： 157-164

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备6-苄基腺嘌呤（6-benzylaminopurine, 6-BA）的抗体,利用高碘酸盐法将6-BA的代谢产物6-苄基腺苷（6-benzylaminopurine riboside, 6-BAR）分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,制备出免疫抗原6-BAR-BSA和包被抗原6-BAR-OVA。采用紫外扫描（UV）和凝胶电泳（SDS-PAGE）对人工抗原进行初步鉴定。用6-BAR-BSA以背部皮下多点注射的方式免疫4只BALB/c小鼠（编号1—4）,免疫剂量50μg/只,间隔21 d, 4免后10 d断尾采血制备鼠源多克隆抗体血清。间接ELISA测定血清效价,间接竞争ELISA测定血清敏感性及特异性。结果显示,6-BA人工抗原制备成功,免疫小鼠血清效价均达到1∶51 200以上,2号小鼠血清效价最高为1∶204 800,且其对6-BA的半数抑制浓度(IC₅₀)为13.48μg/L,线性范围为0.26～701.45μg/L,与激动素、赤霉素、4-氯苯氧乙酸钠、腐霉利、呋喃苯烯酸钠、BSA、OVA交叉反应率均小于0.01%。综上,成功制备了6-BA人工抗原,并通过动物免疫得到高敏感性、高特异性鼠源多克隆抗体。