文献类型： 中文期刊

作者： 纪燕 ¹ ; 熊祺琰 ¹ ; 王佳 ¹ ; 张必雄 ¹ ; 倪博 ¹ ; 马庆红 ¹ ; 冯志新 ¹ ; 刘茂军 ¹ ; 邵国青 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所

关键词： 猪鼻支原体;可变脂蛋白;细胞黏附

期刊名称： 中国人兽共患病学报

ISSN： 1002-2694

年卷期： 2016 年 32 卷 04 期

页码： 338-343

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp)家族为研究对象,鉴定其各成员对宿主细胞的黏附能力。方法根据已公布的猪鼻支原体vlp家族7种成员的基因序列设计引物,构建重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,筛选获得阳性克隆。重组工程菌经IPTG诱导表达目的蛋白,经镍柱亲和层析获得7种纯化的vlp重组蛋白。利用间接免疫荧光法及微孔板定量法分别对vlp各个成员的黏附功能进行鉴定。结果成功构建了7种重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,获得阳性重组工程菌。经IPTG诱导及镍柱亲和层析纯化,获得了较纯的7种vlp重组蛋白。间接免疫荧光及微孔板黏附定量试验检测结果显示,重组蛋白vlpA、vlpB、vlpC、vlpE、vlpG可黏附PK细胞,而重组vlpD和vlpF蛋白黏附能力不明显。结论本研究成功构建了猪鼻支原体7种vlp的重组蛋白,并对其黏附功能进行了初步鉴定,证明部分vlp属于猪鼻支原体的黏附因子。