文献类型： 中文期刊
作者： 赵宁 1 ; 恽时锋 2 ; 王芳 1 ; 范志宇 1 ; 胡波 1 ; 刘涛 1 ;
作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所
2.南京军区南京总医院比较医学科
关键词： 兔;支气管败血波氏杆菌;坏死毒素(DNT);原核表达;间接ELISA
期刊名称： 中国比较医学杂志
ISSN： 1671-7856
年卷期： 2011 年 21 卷 04 期
页码： 47-51
摘要： 目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)DNT蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌dnt基因序列(AB020025)针对其N-端设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pET-28a(+)载体中,以E.coli BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白DNT1作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数,建立检测支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1抗体的ELISA方法。结果成功克隆了dntN-端的基因序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白DNT1具有良好的抗原性。应用重组蛋白DNT1为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白DNT1抗原的包被浓度为6.25μg/mL,最适血清稀释度为1∶100。结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了一种比较实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。
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