文献类型： 中文期刊
作者： 王丹 1 ; 王旭辉 2 ; 高兴旺 2 ; 李冠 3 ;
作者机构： 1.新疆大学生物工程研究中心;新疆农业科学院生物质能源研究所
2.;新疆大学生物工程研究中心;新疆农业科学院生物质能源研究所
3.;新疆大学生物工程研究中心;新疆农业科学院生物质能源研究所;
关键词： 甜瓜;全缘叶基因;PLL;CRISPR/Cas9;潮霉素
期刊名称： 新疆农业科学
ISSN： 1001-4330
年卷期： 2018 年 02 期
页码： 238-245
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 【目的】以新疆甜瓜地方品种老汉瓜为研究材料,对其全缘叶基因进行基因编辑,构建新疆甜瓜CRISPR/Cas9敲除载体,分析甜瓜耐受潮霉素最大浓度,为研究新疆甜瓜裂叶基因的功能奠定基础。【方法】在课题组前期确定甜瓜全缘叶基因PLL的基础上,结合甜瓜基因组数据,设计PLL基因外显子的特异靶位点,构建甜瓜全缘叶基因PLL的CRISPR/Cas9敲除载体,将构建好的载体转化到大肠杆菌中,并测序验证,然后对甜瓜耐受潮霉素浓度进行分析。【结果】针对全缘叶基因PLL外显子选择一个长约20 bp的靶位点,根据靶位点设计sgRNA框,并成功将其构建到CRISPR/Cas9敲除载体上,然后将载体成功转化到大肠杆菌中。分析出甜瓜可耐受潮霉素的最大浓度为10 mg/L。【结论】成功获得甜瓜全缘叶基因PLL的敲除载体,并转化到大肠杆菌中。分析出甜瓜耐受潮霉素的最大浓度,为进一步利用CRISPR/Cas9基因编辑技术研究新疆甜瓜裂叶基因pll的功能奠定基础。
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