文献类型： 中文期刊
作者： 冷小茜 1 ; 叶欢 1 ; 杜浩 1 ; 李创举 1 ; 危起伟 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院长江水产研究所农业部淡水生物多样性保护重点实验室
关键词： 中华鲟;卵黄蛋白原;ELISA;抗血清
期刊名称： 水生生物学报
ISSN： 1000-3207
年卷期： 2018 年 04 期
页码： 779-785
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)被认为是一种理想的雌激素和类雌激素标志物,通过建立一种中华鲟Acipenser sinensis血浆Vtg水平的检测方法,进而开发一项中华鲟性腺成熟度的诊断技术。首先通过RACEPCR方法扩增得到中华鲟vtg基因cDNA序列,氨基酸序列分析预测其蛋白分子量大小为196 k D。构建Vtg功能区段融合原核表达载体p ET32a(+)-vtg并表达纯化重组蛋白,并以重组蛋白免疫兔子获得多克隆抗血清,Western blotting检测显示抗血清的特异性较好。以纯化的中华鲟重组Vtg蛋白为抗原,中华鲟Vtg多克隆抗血清为抗体,建立了中华鲟血浆Vtg的间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA),标准曲线线性回归方程为y=–0.2916x+0.6794,相关系数R~2为0.9976。该方法检测的灵敏度为4.12μg/m L,最低检测限为0.3μg/m L,批内和批间变异系数分别为2.52%和3.42%。通过对不同发育时期雌性中华鲟血样检测,表明此ELISA方法可初步用于雌性中华鲟性腺发育时期监测。
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