文献类型： 中文期刊

作者： 王勋 ¹ ; 李鸽 ² ; 李青梅 ³ ; 吕镕州 ¹ ; 孟泽锟 ¹ ; 柴书军 ³ ; 杨继飞 ³ ; 郭军庆 ³ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南农业大学动物医学院

2.西北农林科技大学动物医学院

3.河南省农业科学院

关键词： 禽流感病毒;H7N9;单克隆抗体;广谱性;中和活性

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2022 年 011 期

页码： 119-126

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： H7N9亚型禽流感病毒（AIV）的快速进化与变异使得其逃脱现有抗体的识别，为提供H7亚型AIV鉴别诊断所需重要材料，制备可识别H7亚型AIV HA蛋白的单克隆抗体（mAb）。采用差速离心法纯化的H7N9亚型AIV（A/Chicken/Guangdong/SW154/2015）免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术制备杂交瘤细胞，采用血凝抑制（HI）试验、免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）和间接ELISA检测方法筛选阳性杂交瘤细胞株。结果显示，获得5株稳定分泌抗H7N9 AIV HA蛋白mAb的杂交瘤细胞，腹水ELISA效价均为1∶1 000 000；其中，4株mAb的重链为IgG1,1株mAb的重链为IgG2b，轻链均为κ链。特异性测定结果显示，5株mAb仅与H7亚型AIV反应，不与其他亚型流感病毒发生反应；广谱性测定结果显示，5株mAb均可与不同年份分离出的H7亚型AIV发生反应；HI结果显示，腹水针对H7-Re3抗原株的HI效价为7 log2～12 log2;MDCK细胞微量中和试验结果显示，5株mAb均具有中和活性；Dot blot检测结果显示，5株mAb均可识别H7-Re2抗原株和H7-Re3抗原株；Western blot检测结果表明，5株杂交瘤细胞培养上清均在63 ku附近出现1条特异性的蛋白质条带，说明这5株mAb均识别线性表位。综上，成功制备了5株广谱性识别H7 AIV HA蛋白的单克隆抗体。