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鸭肝炎病毒Ⅰ型基因片段的原核表达及单克隆抗体的制备

文献类型: 中文期刊

作者: 高骏 1 ; 孙凤萍 1 ;

作者机构: 1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所

关键词: 鸭肝炎病毒Ⅰ型;原核表达;单克隆抗体

期刊名称: 上海农业学报

ISSN: 1000-3924

年卷期: 2012 年 28 卷 02 期

页码: 17-20

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 根据Genebank上已报道的鸭肝炎病毒Ⅰ型基因的全长序列,设计了1对引物,通过RT-PCR方法扩增出特异的DHV-Ⅰ基因片段;将该片段克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌Rosetta-gami(DE3),并用IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,获得了表观分子量在20kD左右的融合表达蛋白;将表达纯化后的蛋白作为抗原,免疫BALB/c健康小鼠,筛选和制备了1株DHV-Ⅰ单克隆抗体细胞株。Western-blot及ELISA分析表明:表达的重组蛋白均能与鸭DHV-Ⅰ阳性血清和制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体产生反应。同时,制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体除了能与重组蛋白反应,还能识别天然的DHV-Ⅰ病毒蛋白。

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