文献类型： 中文期刊
作者： 谢实龙 1 ; 汪小福 1 ; 丁晨露 1 ; 祝旋 1 ; 汤婷 1 ; 马同富 1 ; 蔡健 1 ; 徐俊锋 1 ;
作者机构： 1.阜阳师范学院;浙江省农业科学院浙江省植物有害生物防控重点实验室
关键词： 转基因大豆MON89788;重组酶聚合酶扩增(RPA);qRT-PCR;快速检测;转基因大豆
期刊名称： 农业生物技术学报
ISSN： 1674-7968
年卷期： 2019 年 07 期
页码： 1301-1310
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： MON89788是较早被批准商业化种植的转基因大豆(Glycine max)品种,种植范围广,产品流通量大。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification, RPA),针对MON89788的转化体特异性序列设计了引物和探针,利用正反向引物筛选的方法获得了最佳引物组合,并对反应的温度、引物和探针的浓度进行了优化选择。结果表明,RPA在29.5～43.1℃范围内都能扩增,对温度的容忍度较大,高浓度的探针会影响实时荧光RPA的扩增效率。同时对实时荧光RPA检测体系的特异性、灵敏度和适用性等进行测试,最终建立了MON89788实时荧光RPA检测方法。该检测方法特异性强,对MON89788的绝对检测限(absolute limit of detection, aLOD)可达到40拷贝,相对检测限(relative limit of detection, rLOD)为0.05%,对实际样品的检测在39℃,10 min内完成,是实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测时间的0.07～0.13倍。该恒温、快速的检测方法为转基因成分的快速检测提供了新的技术支持,有望用于转基因成分的现场快速检测。
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