文献类型： 中文期刊

作者： 江锦秀 ¹ ; 林裕胜 ¹ ; 张靖鹏 ¹ ; 游伟 ¹ ; 张龙 ² ; 毛坤明 ³ ; 胡奇林 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所

2.福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)

3.福清市畜牧兽医中心

关键词： 山羊地方性鼻内肿瘤病毒;单克隆抗体;间接ELISA

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2023 年 001 期

页码： 45-50

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立检测山羊地方性鼻内肿瘤病毒（ENTV-2）的间接ELISA方法，本研究以纯化的ENTV-2免疫BALB/c小鼠，采用间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆，经3次克隆纯化后获得1株能够稳定分泌ENTV-2特异性单克隆抗体（MAb）的细胞株，命名为6E4，并采用鼠MAb亚类鉴定试剂盒鉴定6E4 MAb的亚类，结果显示，MAb 6E4的亚类为κ链、Ig G1亚型。进一步以6E4为检测抗体，经各反应条件的优化建立了检测鼻液样品中ENTV-2的间接ELISA方法，该方法的临界值为0.323。利用该方法 检测羊口疮病毒（ORFV）、绵羊肺炎支原体（Movi）、丝状支原体山羊亚种（Mmc）以及纯化的ENTV-2和ENTV-2患病羊鼻液样品，结果显示，除纯化的ENTV-2及ENTV-2患病羊鼻液样品的检测结果呈阳性外，ORFV、Movi、Mmc的检测结果均为阴性，该方法特异性较强。将纯化的ENTV-2 （以蛋白浓度换算） 2倍倍比稀释（20μg/mL～0.08μg/mL）后，利用建立的间接ELISA方法检测，结果显示，纯化的ENTV-2稀释至0.3125μg/mL时检测结果仍可判定为阳性，该方法敏感性较高。批内、批间重复性试验结果显示，二者变异系数均小于10%，该方法重复性较好。采用荧光定量RT-PCR方法和本实验建立的间接ELISA方法检测109份临床鼻液样品，比较二者之间的符合率，结果显示，该间接ELISA方法与本研究室前期建立的荧光定量RT-PCR的检测结果符合率达94.5%，表明本研究建立的间接ELISA方法可用于ENTV-2感染的临床快速检测。本研究建立的ENTV-2间接ELISA方法为ENT的净化提供了技术手段。