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T7噬菌体DNA的提取及其反向遗传拯救方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 徐海 1 ; 王义伟 1 ; 陈瑾 1 ; 郑其升 1 ; 侯继波 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： T7噬菌体;DNA提取;电转化;反向遗传拯救

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2012 年 28 卷 02 期

页码： 355-358

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从T7噬菌体培养液中粗提噬菌体颗粒,经热裂解后用苯酚、氯仿抽提进而获得纯净的T7噬菌体DNA。用PCR、酶切法鉴定T7噬菌体DNA的完整性。通过对不同感受态细菌浓度、T7噬菌体DNA用量、电转化电压条件的优化,建立了T7噬菌体反向遗传拯救方法。结果显示,提取的DNA结构完整,能够被特异性酶切割,多克隆位点序列正确。T7噬菌体的反向遗传拯救方法最优化条件为200 ng T7噬菌体DNA、1 ml 5×109感受态细菌、1.5 kV电转化电压,在此条件下获得的拯救效率为3.5×105 PFU/ng(DNA)。

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