文献类型： 中文期刊

作者： 程序 ¹ ; 仇汝龙 ¹ ; 范志宇 ¹ ; 胡波 ¹ ; 陈萌萌 ¹ ; 宋艳华 ¹ ; 薛家宾 ¹ ; 朱伟峰 ¹ ; 钱莺娟 ² ; 王芳 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程重点实验室

2.南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室

关键词： 多杀性巴氏杆菌;支气管败血波氏菌;双重TaqMan qPCR

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2021 年 006 期

页码： 671-677

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为提高家兔呼吸道疫病主要细菌性病原检测的可靠性和标准化,根据GenBank中多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida） Kmt基因与支气管败血波氏菌（Bordetella bronchiseptica） Fla基因分别设计特异性引物和探针,对反应条件进行优化,建立兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏菌双重TaqMan qPCR方法,并初步用于检测家兔肺脏及鼻拭子临床样本。结果显示,该方法建立的标准曲线在标准品浓度为2.35×10⁶～2.35 copies/μL时有良好的线性关系;与绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、沙门菌、产气荚膜梭菌无交叉反应;最低检测限均为2.35 copies/μL;批内、批间重复性检验变异系数均小于2%。检测70份临床样本DNA结果显示,多杀性巴氏杆菌阳性率为50.0%,支气管败血波氏菌阳性率为42.9%,混合感染率为21.4%,该方法与细菌分离培养和常规PCR符合率分别为80.0%、 92.0%。以上数据表明,本研究建立的双重TaqMan qPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,无需病原菌的培养即可用于临床样品的快速检测,为兔多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏菌的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、高效、准确的检测方法。