文献类型： 中文期刊

作者： 罗可 ¹ ; 王珞 ¹ ; 刘思睿 ¹ ; 张卫民 ² ; 姚明勇 ¹ ; 潘雪珍 ³ ; 刘辉 ¹ ;

作者机构： 1.贵州省生物技术研究所/贵州省农业生物技术重点实验室

2.清镇红枫山韵茶场有限公司

3.贵州发来地农业科技有限公司

关键词： 山茶刺盘孢菌;CRISPR/Cas9;CcSOL4;基因编辑

期刊名称： 贵州农业科学

ISSN：

年卷期： 2023 年 012 期

页码： 66-74

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】以调控茶树炭疽病菌（Colletotrichum camelliae）中的植物真菌毒素（Solanapyrones）合成的CcSOL4为例，构建CRISPR-Cas9的基因敲除载体系统，为CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术在茶炭疽菌中的应用奠定基础。【方法】通过对转录因子CcSOL4的基因序列分析，选择5个靶点以PCBC载体为模板扩增目的片段，再与表达载体PKSE401发生重组构建基因标记载体。以携带Cas9编码基因的PKSE401双元双靶点载体系统为骨架，以PCBC载体为模板扩增相应的sgRNA,运用Overlapping PCR以及Golden Gate Cloning技术构建针对炭疽病的双靶点和三靶点CRISPR/Cas9编辑载体。【结果】双靶点载体片段及三靶点载体片段扩增后大小为650～750 bp,将上述PCR片段连入载体PKSE401,双靶点载体1Sol4和2Sol4经阳性鉴定得到650 bp片段，三靶点载体3Sol4经阳性鉴定后得到1 200 bp的片段。【结论】重组载体构建成功，并建立了茶炭疽菌C.camelliae的CRISPR/Cas9敲除体系。