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重组野猪α-干扰素基因的高效表达和下游工艺的研发

文献类型： 中文期刊

作者： 李文辉 1 ; 刘娣 2 ; 王君伟 3 ; 徐冬梅 4 ; 杨秀琴 1 ;

作者机构： 1.东北农业大学动物科技学院

2.黑龙江省农业科学院

3.东北农业大学

4.哈药集团生物工程有限公司

关键词： 野猪α-干扰素;基因优化;发酵工艺;复性;纯化;活性检定

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2008 年 28 卷 06 期

页码： 65-70

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用PCR方法,从东北野猪和长白猪的肌肉基因组DNA中分别扩增出一条501bp的基因片段,与GenBank上登载的猪α-干扰素基因序列相比,核苷酸同源性达到98.4%以上。以其中野猪α-干扰素基因片段为参考模板,经过密码子优化、5′和3′区域的mRNA二级结构优化,全基因合成得到编码野猪α-干扰素基因成熟肽的基因。克隆该基因到原核表达载体pWL之中.随后转化至宿主菌DH-5α。经过SDS-PAGE电泳检测,发酵后的重组野猪IFN-α-干扰素基因的蛋白表达量大于25%。复性纯化后的重组蛋白,经过VSV-WISH系统检测,其生物活性为4.45×106IU/mg。

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