文献类型： 中文期刊

作者： 戴建军 ¹ ; 吴彩凤 ¹ ; 张树山 ¹ ; 顾晓龙 ¹ ; 张廷宇 ¹ ; 吴志强 ¹ ; 张德福 ¹ ;

作者机构： 1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 植酸酶;腮腺分泌蛋白;转基因核移植;猪

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2014 年 41 卷 11 期

页码： 1-6

收录情况： 北大核心

摘要： 为获得具有植酸酶腮腺特异性表达的猪转基因克隆胚胎,本研究使用植酸酶腮腺特异性表达的DNA质粒(包含腮腺分泌蛋白(parotid secretary protein,PSP)启动子与终止子序列、Neo筛选基因、绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因和高比活的植酸酶appA基因),采用脂质体转染和基因素418(G418)药物抗性筛选的方法获取稳转细胞系,并利用体细胞核移植技术获得植酸酶转基因胚胎。结果表明,本研究构建的DNA质粒可用于细胞筛选,且质粒越小,细胞的转染效率越高,14.89kb的YM6552仅获得了7.1%的转染率,EGFP质粒则获得了43.4%的转染效率。在单克隆形成上,较小的pYN3600也获得了更高的单克隆形成数(25个),其中表达EGFP的单克隆有14个,植酸酶PCR阳性集落有11个,高于YM6552的单克隆数(19、8和6)。转基因细胞构建重构胚胎后,所有的胚胎均能表达绿色荧光蛋白,虽其体外发育能力有所下降,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,本研究所采用的植酸酶质粒、细胞筛选方法和核移植技术可生产植酸酶重构胚。