文献类型： 中文期刊

作者： 李京泽 ¹ ; 于永翔 ² ; 刘定远 ² ; 王春元 ² ; 王印庚 ² ; 杨新月 ² ; 张正 ² ;

作者机构： 1.中国海洋大学水产学院

2.中国水产科学研究院黄海水产研究所海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室

关键词： 美人鱼发光杆菌美人鱼亚种;毒力质粒;质粒消除;胞外酶活性;致病性

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2024 年 008 期

页码： 2831-2843

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(Photobacterium damselae subsp. damselae, PDD)是一种可导致多种海洋生物患病的病原菌，比较基因组测序分析表明，具有高致病性的PDD菌株内携带大质粒pPDD1608，基因注释分析表明该质粒携带多种毒力基因和分泌系统相关基因，而对于其功能机制缺乏报道。【目的】以一株高致病性PDD为研究对象，通过诱导缺失突变获得质粒缺失菌株，比较分析野生菌株与质粒缺失株的表型与致病性相关特征差异，明确该质粒对PDD理化表型和致病力的影响。【方法】建立变温-SDS质粒去除方法，构建菌株PDD1608的质粒缺失株ΔpPDD1608；利用TSB固体培养基及扫描电镜观察分析菌株PDD1608与ΔpPDD1608的表观形态特征；通过细菌微量生化鉴定管测定菌株PDD1608与ΔpPDD1608的生理生化表型；利用K-B纸片扩散法测定菌株PDD1608与ΔpPDD1608的药物敏感性；使用指示培养基测定菌株PDD1608与ΔpPDD1608的体外磷脂酶活性和溶血性；通过注射感染许氏平鲉测定菌株PDD1608与ΔpPDD1608的致病力。【结果】变温-SDS法可有效去除菌株PDD1608的大质粒，并基于全基因组序列信息建立了特异位点PCR质粒去除效果检测方法；理化检测结果表明，质粒缺失株与野生株的药物敏感性与生理生化特性并无差异，但质粒缺失株的溶血性与磷脂酶活性显著降低；注射感染试验表明，野生株对许氏平鲉表现为高致病性，实验鱼在24h内全部死亡，而质粒缺失株对许氏平鲉致病性较低，24h死亡率仅为56.6%。【结论】通过对野生株与质粒缺失株溶血能力、磷脂酶活性及对许氏平鲉致病力的研究证实，毒力质粒pPDD1608是介导菌株PDD1608具有高致病力的重要元件。为后续深入分析该毒力质粒及染色质介导的PDD致病和毒力蛋白分泌机制提供了技术支撑与理论基础。