文献类型： 中文期刊

作者： 刘芯怡 ¹ ; 权冉 ¹ ; 刘昱成 ² ; 陈俊贞 ¹ ; 倪慧莹 ¹ ; 付强 ¹ ; 史慧君 ¹ ;

作者机构： 1.新疆农业大学动物医学学院

2.省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

关键词： 牛病毒性腹泻病毒(BVDV);小干扰RNA(siRNA)技术;肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2);Sushi、Nidogen和EGF样结构域1(SNED1)

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2024 年 32 卷 009 期

页码： 2150-2158

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 牛病毒性腹泻/粘膜病(bovine viral diarrhea/mucosal disease,BVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的接触性传染病,会导致持续性感染,感染犊牛(Bos taurus)会不断向外界排出病毒.本课题组前期使用RNA-蛋白质相互作用检测(RNA-protein interaction detection,RaPID)技术,筛选出了与BVDV互作的肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor associated factor 2,TRAF2)和Sushi、Nidogen和EGF样结构域1(Sushi,Nidogen and EGF like domains 1,SNED1)基因.为了确定TRAF2和SNED1基因对BVDV复制的影响,本研究利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术敲低牛肾细胞(madin-darby bovine kidney cells,MDBK)中TRAF2和SNED1基因,通过qPCR检测TRAF2和SNED1基因的敲低效率和BVDV感染TRAF2和SNED1敲低细胞的BVDV 5'UTR RNA水平变化;使用免疫荧光染色法检测BVDV复制的中间产物双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)的积累变化;通过荧光倒置显微镜观察致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),使用Karber法计算子代病毒滴度变化.结果表明,TRAF2和SNED1的mRNA水平显著性降低(P<0.05),表明成功构建了TRAF2以及SNED1敲低细胞(TRAF2 KD和SNED1 KD);BVDV感染对照组(NC)36 h开始出现明显的空斑、脱落、死亡等CPE现象,TRAF2 KD细胞和SNED1 KD细胞的CPE现象减弱;与对照组(NC)相比,在BVDV感染TRAF2 KD和SNED1 KD细胞后,BVDV 5'UTR RNA水平在24、36和48h显著下降(P<0.05);通过免疫荧光染色检测BVDV复制的中间产物dsRNA形成和累积,在TRAF2 KD和SNED1 KD细胞中36和48h绿色荧光强度明显降低;BVDV感染TRAF2 KD和SNED1 KD细胞后48h子代病毒滴度极显著降低(P<0.01).以上结果表明,敲低TRAF2和SNED1会抑制BVDV复制,本研究为揭示BVDV致病机制提供重要依据.